在使用計數(shù)板時，如何避免誤差和污染？

在使用計數(shù)板進行細胞或微生物計數(shù)時，避免誤差和污染是至關重要的。以下是一些具體的措施和建議：

避免誤差

確保計數(shù)板清潔無劃痕：

在每次使用前，應檢查計數(shù)板是否清潔，無劃痕或污物。

如若發(fā)現(xiàn)計數(shù)室有污物，需按要求清洗并吹干后再進行實驗。

計數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應符合要求或經(jīng)過校正。

規(guī)范操作：

嚴格按照操作規(guī)程進行，如先蓋血蓋片后加菌液，確保菌液分布均勻，無氣泡產(chǎn)生。

在菌懸液搖勻后，應先在計數(shù)板上蓋上血蓋片，再用滴管吸取少許菌懸液，從計數(shù)區(qū)中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液，利用液體的表面張力一次性充滿計數(shù)區(qū)。

避免先加菌液再覆蓋血蓋片，防止因菌液加入過多導致血蓋片未與計數(shù)板支持柱接觸，或產(chǎn)生氣泡而影響計數(shù)準確性。

提高計數(shù)準確性：

選擇多個區(qū)域進行計數(shù)，然后取平均值，以提高計數(shù)的準確性。

優(yōu)先選擇細胞分布均勻的區(qū)域進行計數(shù)，避開邊緣區(qū)域和細胞過于密集或稀疏的區(qū)域。

只計數(shù)完整的細胞，對于破碎的細胞、細胞碎片和雜質(zhì)應不予計數(shù)。

對于壓線的細胞，通常采用“計上不計下，計左不計右”的原則，避免重復計數(shù)。

縮小計數(shù)域誤差：

計數(shù)域誤差是由于細胞在計數(shù)室內(nèi)呈隨機分布，所能計數(shù)的細胞分布范圍有限而產(chǎn)生的。

通過擴大計數(shù)范圍和計數(shù)數(shù)目，可以縮小這種誤差。例如，在計數(shù)前進行誤差估計，然后決定所需計數(shù)的數(shù)目和計數(shù)范圍。

避免污染

無菌操作：

在整個操作過程中，應嚴格遵守無菌操作原則，防止外部微生物污染樣本。

使用無菌器材和試劑，確保實驗環(huán)境的清潔和無菌。

防止交叉污染：

在處理不同樣本時，應使用不同的器材和試劑，避免交叉污染。

及時更換使用過的器材和試劑，防止污染擴散。

樣本保存：

樣本應妥善保存，避免長時間暴露在空氣中或受到其他污染源的污染。

樣本應在適當?shù)臏囟群蜐穸葪l件下保存，以確保其穩(wěn)定性和準確性。